《蜘蛛俠2》的故事產生在第1集結束2年後，彼得·帕克繼續過著自己的雙重生活，平時是性情暖和的大學生，晚上則化身為擁有超能力的英雄蜘蛛俠，可是這兩者之間的微妙平衡卻越來越難以維係，愛人、朋友和慈愛的阿姨都開始懷疑他的真實身份；同時他還多了個更可怕的敵人——章魚博士(阿爾弗萊德·莫利納)，彼得·帕克必須用盡全力對付這位邪惡魔頭的瘋狂計劃。